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你不插入2 A肽的话，就要在 CAS9 和puro之间重新插入一个puro的启动子，和cas9后要加终止子。 而2A肽可以自我切割，这样就不需要那么多序列（特别是 慢病毒转染，序列太大会影响病毒包装滴度）。 为什么又把puro基因放到内含子里？ 请问crispr/cas9基因编辑敲入实验，设计的donor载体上同源臂之间加个内含子是什么原因？ 比如像这种，EF1a这个启动子下面，GFP先启动，然后目的基因是在puro这个位置这里，相当于5‘先表达GFP，然后目的基因在3’端，，那这种情况下，GFP的终止密码子一定要记得拿掉，不然转录在GFP这里就停下来了，后面的目的基因就不会被转录翻译了。
嘌呤霉素 叭？ 看看对应载体上是不是有个 PuroR 基因鸭？ 转化后要筛选出成功整合的细胞，需要用抗生素或者其他物质杀死未整合的细胞或者在缺素培养基上只让整合的细胞长起来。 不同抗生素对不同物种的效力不一样，有的抗生素只能杀某一类细菌，有的抗生素能杀某一类真核生物。 这样某一类. 实际病毒包装中，常需要插入报告基因（如GFP）和抗性基因（如Puro），这使得目的片段的容量进一步缩小至3kb左右。 目前通过载体优化，例如删去不必要的基因，减小启动子长度，可使目的基因的片段容量扩大到4kb左右。 科研中常用的质粒类型多样，根据功能可分为以下几类，每种类型具有独特的设计和应用场景： 一、克隆质粒（Cloning Plasmids） 功能：用于外源 DNA 片段的克隆和扩增，是分子生物学基础操作的核心工具。 特点： ①含多克隆位点（MCS）：包含多个限制性内切酶识别位点，便于目的基因插入。 ②复制.
双报告基因 名称：egfp/puro 荧光：green； 药物筛选：puromycin 序列：1317bp.
Puro是它的一个高端系列，之前朋友送过我礼盒，里面有5支，矿物系列金银2支，植物系列肉桂、芦荟、姜黄各一只。 Puro矿物金：主打抗菌消炎，含有TRUE GOLD和MICA微粒，挤出来是淡金色的果冻质地，刷起来清清凉凉，非常舒服，不会有那种化学磨擦剂的感觉。 一般的质粒都带筛选标签，根据标签来呗。比如说 puro抗性 的，拿puro筛选一下，看细胞死不死。瞬转的话，细胞不传代，就还会持续表达。检测mRNA，pr， 这得看你这质粒的转染效率，太低也可能不行，另外蛋白太大的话WB也不好做。我们之前构建flag-MLL-AF9-IRES-YFP的质粒它是带荧光的，转染后荧光也. 5） SV40启动子启动的puro标记 6） 2个腺病毒ITR序列和2个与腺病毒Ad5同源的序列，可用于将ORF序列同源重组到腺病毒载体，直接用于腺病毒的生产。
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